?變性細(xì)胞裂解液

貨號：ZK-PL4198

規(guī)格：50ml  500ml

描述：組織細(xì)胞裂解緩沖液，為您提供完整的組織、細(xì)胞總蛋白制備方案，對動物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用。裂解液中含有去氧膽酸鈉和EDTA，裂解得到的蛋白樣品可用于常規(guī)的Western、IP等實(shí)驗。

儲存：4℃保存  12個月有效

規(guī)格：50ml  500ml

操作步驟：

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物：

1.800g 4℃離心 5 分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計細(xì)胞離心后的體積（PCV, 106 cells=~20ul, 107 cells=~100ul PCV）；
2.每 50～100ul PCV 加入5倍體積組織細(xì)胞裂解緩沖液（250~500ul）,冰浴放置10分鐘，每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；
3.12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物
注意：假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先95℃加熱5分鐘，迅速冰浴5分鐘，然后再進(jìn)行步驟3
制備組織裂解產(chǎn)物：
1.取 50-100mg 組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的 PBS 洗滌2次離心棄去 PBS；
2.加入 0.5-1ml 預(yù)冷的組織細(xì)胞裂解緩沖液；
3.4℃用玻璃勻漿器勻漿 20-40 次，直到 95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；
4.12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物；
注意：假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先95℃加熱5分鐘，迅速冰浴5分鐘，然后再進(jìn)行步驟4
說明：
1.在轉(zhuǎn)移上清液時不要吸入底部的沉淀物；
2.在做免疫沉淀時最好在實(shí)驗前進(jìn)行蛋白的提取，以避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；
3.在該裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇進(jìn)行添加。??