?　子科生物報道：在癌癥的世界里，非小細胞肺癌（NSCLC）堪稱 “頭號殺手”，嚴重威脅著人類的健康。近年來，盡管醫(yī)學不斷進步，手術、化療、放療、分子靶向治療以及免疫治療等手段紛紛登場，但 NSCLC 患者的 5 年總體生存率依舊不容樂觀。其中，吉西他濱（Gemcitabine）作為治療 NSCLC 的常用化療藥物，卻面臨著一個棘手的難題 —— 耐藥性。許多患者在使用吉西他濱治療一段時間后，腫瘤細胞會逐漸適應藥物，導致治療效果大打折扣，病情再次惡化。這使得探尋吉西他濱耐藥的機制，尋找新的治療靶點，成為了醫(yī)學領域亟待攻克的難關。

為了破解這一難題，南昌大學的研究人員勇挑重擔，開展了一項關于 NSCLC 吉西他濱耐藥機制的研究。經(jīng)過不懈努力，他們發(fā)現(xiàn)了一種名為 hsa_circ_0125356 的環(huán)狀 RNA（circRNA）在其中扮演著關鍵角色，這一發(fā)現(xiàn)為 NSCLC 的治療帶來了新的曙光。

研究人員主要采用了多種關鍵技術方法。通過 circRNA 測序技術篩選差異表達的 circRNA；運用熒光原位雜交（FISH）、RNA 免疫沉淀（RIP）等技術驗證分子間的相互作用；借助細胞功能實驗，如 CCK-8、EdU、Transwell、TUNEL 等實驗，探究相關分子對細胞增殖、遷移、凋亡以及耐藥性的影響；還構(gòu)建了小鼠異種移植瘤模型進行體內(nèi)實驗驗證。

下面來看具體的研究結(jié)果：

發(fā)現(xiàn)吉西他濱耐藥相關 circRNA：研究人員構(gòu)建了吉西他濱耐藥的 A549 細胞模型（A549-GR），通過 circRNA 測序分析，篩選出 12 個差異表達的候選 circRNA，其中 hsa_circ_0125356 在 A549-GR 細胞中表達較高。進一步研究發(fā)現(xiàn)，hsa_circ_0125356 由 SLC7A11 基因外顯子反向剪接形成，具有環(huán)狀結(jié)構(gòu)且穩(wěn)定性高，主要定位于細胞質(zhì)。臨床數(shù)據(jù)顯示，hsa_circ_0125356 在 NSCLC 腫瘤組織中顯著上調(diào)，且高表達與患者較差的預后相關。

1. hsa_circ_0125356 促進 NSCLC 細胞對吉西他濱的耐藥性：在 A549 和 A549-GR 細胞系中，干擾 hsa_circ_0125356 可抑制 A549-GR 細胞活力，部分逆轉(zhuǎn)耐藥性；而過表達 hsa_circ_0125356 則增加 A549 細胞活力。EdU 實驗表明其促進細胞增殖，TUNEL 實驗顯示其抑制細胞凋亡，Transwell 實驗證實其增強細胞遷移能力，這些結(jié)果均表明 hsa_circ_0125356 可促進 NSCLC 細胞對吉西他濱的耐藥性。
2. hsa_circ_0125356 作為 miR-582-5p 的海綿：利用生物信息學工具預測并經(jīng)實驗驗證，hsa_circ_0125356 可與 miR-582-5p 結(jié)合，作為其海綿負向調(diào)控 miR-582-5p 的表達。在 NSCLC 組織中，miR-582-5p 表達顯著下調(diào)，且與 hsa_circ_0125356 表達呈負相關。細胞功能實驗表明，miR-582-5p 可逆轉(zhuǎn) hsa_circ_0125356 誘導的 NSCLC 細胞增殖、遷移和耐藥性。
3. FGF9 是 miR-582-5p 的靶基因并增強吉西他濱耐藥性：通過生物信息學分析、雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灪?Western blotting 驗證，F(xiàn)GF9 是 miR-582-5p 的下游靶基因。在 NSCLC 中，F(xiàn)GF9 表達顯著上調(diào)，與 hsa_circ_0125356 呈正相關，與 miR-582-5p 呈負相關。功能實驗顯示，F(xiàn)GF9 可促進腫瘤細胞對吉西他濱的耐藥性。
4. hsa_circ_0125356 通過 miR-582-5p/FGF9 軸維持吉西他濱耐藥性：RNA-seq 和相關實驗表明，hsa_circ_0125356 通過海綿作用調(diào)控 miR-582-5p/FGF9 軸影響吉西他濱耐藥性。干擾 FGF9 可使腫瘤細胞對吉西他濱更敏感，而過表達 FGF9 則增強耐藥性。一系列挽救實驗進一步證實了這一調(diào)控軸在吉西他濱耐藥中的重要作用。
5. FGF9 通過 WNT 信號通路增強吉西他濱耐藥性：KEGG 和 GSEA 分析表明，F(xiàn)GF9 主要通過 WNT 信號通路維持 NSCLC 細胞的吉西他濱耐藥性。Western blot 分析顯示，F(xiàn)GF9 可調(diào)節(jié) WNT 經(jīng)典和非經(jīng)典信號通路相關蛋白以及凋亡相關蛋白的表達。使用 WNT 信號通路抑制劑 WAY 316606 和 XAV-939 處理后，可逆轉(zhuǎn) hsa_circ_0125356 誘導的吉西他濱耐藥性，證明 WNT 信號通路參與其中。
6. hsa_circ_0125356 在體內(nèi)促進吉西他濱耐藥性：構(gòu)建小鼠異種移植瘤模型，體內(nèi)實驗結(jié)果與體外實驗一致。沉默 hsa_circ_0125356 可增強腫瘤細胞對吉西他濱的敏感性，抑制腫瘤生長，促進細胞凋亡；而過表達 hsa_circ_0125356 則相反。免疫組化和 FISH 結(jié)果進一步驗證了 hsa_circ_0125356 對 miR-582-5p/FGF9 軸及 WNT 信號通路的調(diào)控作用。